在我们的实验室若是不能提供很多的色谱柱的情况下,而项目时间紧张的情况下,送到特定的手性公司,以下是氨基酸手性分析柱方法开发小建议,欢迎大家一起来探讨学习。
一、流动相选择
因多糖类衍生物可以在水中和卤代烷烃中溶解,手性方法中避免使用这一类的溶剂,特殊处理工艺的色谱柱除外,所以常规条件的流动相多选用烷烃,和醇类,在正相色谱中,固定相为性较大的化合物,那么醇类在洗脱剂中为强洗脱性溶剂,而烷烃类为弱洗脱性溶剂,选正己烷和乙醇进行方法开发,这一组体系不能将化合物进行分离,将乙醇更改为异丙醇或者正丙醇,或者将正己烷改为正庚烷,可能会有很大的改善,也可能效果不明显,每一种化合物和溶剂之间的相互作用需要不断的尝试。
二、避免固定思维
对于刚开始入门的所有的分析人员来说,可能希望找到一种模式,来使得针对所有的化合物有效,比如,低温一定有助于分离,异丙醇一定比乙醇的体系分离度好,此类等等,但是凡是均有例外,所以需要尝试摸索不能盖棺定论,应具体化合物具体分析。
三、矛盾解决
在整体的研发中,可能会遇到相互矛盾的情况出现,例如,异构体的分离度不够,流动相中增高烷烃的比例,分离度合格了,该浓度下的灵敏度的信噪比太小,灵敏度和分离度之间形成了矛盾,此时尝试柱温的改变和流动体系的改变来满足我们分离的要求。
四、添加剂
酸性添加剂和碱性添加剂,加入添加剂的目的有两个:di一,有效改善峰形,色谱的硅胶填料性质决定了加入碱性添加剂,可以起到扫尾的作用;第二:PH 的作用,可以改善样品在溶剂中官能团的解离。
那么如何选择酸碱添加剂:
1、碱性化合物选碱性添加剂,例如三乙胺 、二乙胺等,添加碱性添加剂可以有效地防止化合物和硅羟基之间的相互作用而引起的拖尾现象;
2、酸性化合物选酸性添加剂:例如三氟乙酸,醋酸等,多糖衍生类固定相的性较大,酸性化合物有可能与固定相结合,从而导致色谱峰洗脱不出来,或者峰形严重拖尾,加入酸性试剂可以有效的抑制化合物的解离,实现化合物的分离。
但是色谱柱都有PH的耐受上限,因此每一款不同的色谱柱的适用说明说上都有zui高的添加量,比如大赛路的色谱柱DEA zui高0.5% 三氟乙酸 0.5%zui高,若是适用使超过上限会对色谱柱的寿命有很大影响。
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